Floresan filtri floresan mikroskopning muhim komponentidir. Oddiy tizim uchta asosiy filtrga ega: qo'zg'atuvchi filtr, emissiya filtri va dikroik oyna. Ular odatda kub shaklida paketlanadi, shunda guruh mikroskopga birga kiritiladi.
Floresan filtri qanday ishlaydi?
Qo'zg'alish filtri
Qo'zg'atuvchi filtrlar ma'lum bir to'lqin uzunligidagi yorug'likni uzatadi va boshqa to'lqin uzunliklarini bloklaydi. Ular filtrni faqat bitta rangdan o'tishga imkon beradigan tarzda sozlash orqali turli xil ranglarni ishlab chiqarish uchun ishlatilishi mumkin. Qo'zg'atuvchi filtrlar ikkita asosiy turga ega - uzoq o'tish filtrlari va tarmoqli o'tkazuvchi filtrlar. Qo'zg'atuvchi odatda florofor tomonidan so'rilgan to'lqin uzunliklarini o'tkazadigan tarmoqli o'tkazgich filtri bo'lib, flüoresansning boshqa manbalarining qo'zg'alishini minimallashtiradi va flüoresans emissiya zonasida qo'zg'atuvchi nurni bloklaydi. Rasmdagi ko'k chiziqda ko'rsatilganidek, BP 460-495 ni tashkil qiladi, ya'ni u faqat 460-495 nm floresansdan o'tishi mumkin.
U lyuminestsent mikroskopning yorug'lik yo'liga joylashtiriladi va floroforning qo'zg'alish diapazonidan tashqari yorug'lik manbasining barcha to'lqin uzunliklarini filtrlaydi. Filtrning minimal uzatilishi tasvirlarning yorqinligi va yorqinligini belgilaydi. Har qanday qo'zg'atuvchi filtr uchun kamida 40% uzatish tavsiya etiladi, shunda uzatish ideal >85% bo'ladi. Qo'zg'atuvchi filtrning tarmoqli kengligi butunlay floroforning qo'zg'alish diapazonida bo'lishi kerak, shunda filtrning markaziy to'lqin uzunligi (CWL) ftorforning eng yuqori qo'zg'alish to'lqin uzunligiga imkon qadar yaqin bo'lishi kerak. Qo'zg'atuvchi filtrning optik zichligi (OD) fon tasvirining qorong'iligini belgilaydi; OD - filtrning uzatish diapazoni yoki tarmoqli kengligidan tashqaridagi to'lqin uzunliklarini qanchalik yaxshi blokirovka qilish o'lchovidir. Minimal OD 3.0 tavsiya etiladi, lekin OD 6.0 yoki undan yuqori boʻlsa ideal.
Emissiya filtri
Emissiya filtrlari namunadan kerakli floresansning detektorga etib borishiga imkon berish maqsadiga xizmat qiladi. Ular qisqaroq to'lqin uzunliklarini blokirovka qiladi va uzoqroq to'lqin uzunliklari uchun yuqori o'tkazuvchanlikka ega. Filtr turi, shuningdek, raqam bilan bog'langan, masalan, rasmdagi BA510IF (interferentsiya to'sig'i filtri), bu belgi uning maksimal uzatilishining 50% to'lqin uzunligiga ishora qiladi.
Qo'zg'atuvchi filtrlar bo'yicha bir xil tavsiyalar emissiya filtrlari uchun ham amal qiladi: minimal uzatish, tarmoqli kengligi, OD va CWL. Ideal CWL, minimal uzatish va OD kombinatsiyasiga ega emissiya filtri mumkin bo'lgan eng yorqin tasvirlarni, eng chuqur blokirovkani ta'minlaydi va eng zaif emissiya signallarini aniqlashni ta'minlaydi.
Dikroik oyna
Dikroik oyna qo'zg'atuvchi filtr va emissiya filtri orasiga 45 ° burchak ostida joylashtiriladi va emissiya signalini detektor tomon uzatayotganda qo'zg'atuvchi signalni ftorfor tomon aks ettiradi. Ideal dikroik filtrlar va nur ajratgichlar maksimal aks ettirish va maksimal uzatish o'rtasida keskin o'tishlarga ega, qo'zg'atuvchi filtrning tarmoqli kengligi uchun > 95% aks ettirish va emissiya filtrining tarmoqli kengligi uchun > 90% uzatish. Adashgan yorug'likni kamaytirish va lyuminestsent tasvir signalining shovqin nisbatini maksimal darajada oshirish uchun floroforning kesishgan to'lqin uzunligini (l) hisobga olgan holda filtrni tanlang.
Ushbu rasmdagi dikroik oyna DM505 bo'lib, 505 nanometr bu oyna uchun maksimal uzatishning 50% da to'lqin uzunligi bo'lgani uchun shunday nomlangan. Ushbu oyna uchun uzatish egri chizig'i 505 nm dan yuqori o'tkazuvchanlikni, 505 nanometrdan chapga uzatishning keskin pasayishini va 505 nanometrning chap tomonida maksimal aks ettirishni ko'rsatadi, ammo baribir 505 nm dan pastroq uzatishga ega bo'lishi mumkin.
Uzoq o'tish va tarmoqli o'tish filtrlari o'rtasidagi farq nima?
Floresan filtrlarini ikki turga bo'lish mumkin: uzoq o'tish (LP) va tarmoqli o'tish (BP).
Uzoq o'tish filtrlari uzoq to'lqin uzunliklarini uzatadi va qisqaroqlarini bloklaydi. Kesilgan to'lqin uzunligi maksimal uzatishning 50% qiymati bo'lib, kesishma ustidagi barcha to'lqin uzunliklari uzoq o'tish filtrlari tomonidan uzatiladi. Ular ko'pincha dikroik nometall va emissiya filtrlarida qo'llaniladi. Ilova maksimal emissiya yig'ishni talab qilganda va spektral diskriminatsiya istalmagan yoki zarur bo'lmaganda, uzoq o'tkazuvchi filtrlardan foydalanish kerak, bu odatda fon avtofluoresansining nisbatan past darajalariga ega bo'lgan namunalarda bitta chiqaradigan turni yaratadigan zondlarga tegishli.
Tarmoqli o'tish filtrlari faqat ma'lum bir to'lqin uzunligi diapazonini uzatadi va boshqalarni bloklaydi. Ular florofor emissiya spektrining faqat eng kuchli qismini uzatishga imkon berish orqali o'zaro aloqani kamaytiradi, avtoflüoresan shovqinni kamaytiradi va shu bilan uzoq o'tish filtrlari taklif qila olmaydigan yuqori fondagi avtoflüoresan namunalarida signal-shovqin nisbatini yaxshilaydi.
BestScope qancha turdagi floresan filtrlar to'plamini taqdim etishi mumkin?
Filtrlarning ba'zi keng tarqalgan turlari ko'k, yashil va ultrabinafsha filtrlarni o'z ichiga oladi. Jadvalda ko'rsatilganidek.
| Filtrlar to'plami | Qo'zg'alish filtri | Dikroik oyna | To'siq filtri | LED chiroq to'lqin uzunligi | Ilova |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485 nm | ·FITC: Floresan antikor usuli · Apelsin kislotasi: DNK, RNK ·Auramin: sil tayoqchasi ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535 nm | · Rodamin, TRITC: Floresan antikor usuli · Propidiy yodid: DNK · RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365 nm | ·Avto-fluoressensiyani kuzatish ·DAPI: DNKni bo'yash · Hoeches 332528, 33342: xromosomalarni bo'yash uchun ishlatiladi |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405 nm | · Katexolaminlar · 5-gidroksi triptamin · Tetratsiklin: Skelet, tish |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640 nm | · Cy5 · Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Floresansiyani olishda ishlatiladigan filtrlar to'plamlari eng ko'p ishlatiladigan floroforlarga asoslangan flüoresans ilovalarida ishlatiladigan asosiy to'lqin uzunliklari atrofida ishlab chiqilgan. Shu sababli, ular DAPI (ko'k), FITC (yashil) yoki TRITC (qizil) filtr kublari kabi tasvirlash uchun mo'ljallangan florofor nomi bilan ataladi.
| Filtrlar to'plami | Qo'zg'alish filtri | Dikroik oyna | To'siq filtri | LED chiroq to'lqin uzunligi |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485 nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365 nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535 nm |
| FL-Auramin | BP470 | DM480 | BA485 | 450 nm |
| Texas qizil | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560 nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560 nm |
Floresan filtrini qanday tanlash mumkin?
1. Floresans filtrini tanlash printsipi floresan / emissiya nurining iloji boricha tasvirlash uchidan o'tishi va eng yuqori signal-shovqin nisbatini olish uchun bir vaqtning o'zida qo'zg'atuvchi nurni to'liq blokirovka qilishdir. Ayniqsa, multifoton qo'zg'alish va umumiy ichki aks ettirish mikroskopini qo'llash uchun zaif shovqin ham tasvirlash effektiga katta shovqin tug'diradi, shuning uchun signalning shovqin nisbati talabi yuqoriroq.
2. Ftorforning qo‘zg‘alish va emissiya spektrini bilish. Qora fon bilan yuqori sifatli, yuqori kontrastli tasvirni yaratadigan lyuminestsent filtrlar to'plamini yaratish uchun qo'zg'alish va emissiya filtrlari floroforning qo'zg'alish cho'qqilari yoki emissiyalariga mos keladigan hududlarda minimal o'tish diapazoni dalgalanmasi bilan yuqori uzatishga erishishlari kerak.
3. Floresan filtrlarining chidamliligini ko'rib chiqing. Ushbu filtrlar ultrabinafsha (UV) nur hosil qiluvchi kuchli yorug'lik manbalarini o'tkazmasligi kerak, bu "kuyish" ga olib kelishi mumkin, ayniqsa qo'zg'atuvchi filtr, chunki u yorug'lik manbasining to'liq intensivligiga ta'sir qiladi.
Turli lyuminestsent namunali rasmlar
Resurslar Internetda to'planadi va tartibga solinadi va faqat o'rganish va muloqot uchun ishlatiladi. Agar biron bir qoidabuzarlik bo'lsa, o'chirish uchun biz bilan bog'laning.
Yuborilgan vaqt: 09-dekabr 2022-yil